Лабораторная диагностика

Зоонозный кожный лейшманиоз в эндемичной местности с большой степенью вероятности можно диагносцировать на основании клинических симптомов. Однако для полной уверенности производится паразитологическая диагностика путем обнаружения амастиготных форм лейшманий в препаратах, приготовленных из содержимого бугорков или краевого инфильтрата недавно образовавшихся язв. При этом бугорок или участок краевого инфильтрата для обескровливания захватывается и сдавливается пальцами левой руки. На анемизированном участке делается неглубокий надрез. С его стенки концом скальпеля берется кусочек ткани, который вместе с серозной жидкостью переносится на предметное стекло и размазывается по его поверхности. Мазки окрашиваются по Романовскому-Гимзе и просматриваются при иммерсионном увеличении микроскопа. В положительных случаях обнаруживаются амастиготные формы лейшманий, которые находятся не только внутри макрофагов, но и внеклеточно вследствие разрушения последних. Тканевую пульпу для приготовления мазков можно также взять из прокола, сделанного толстой иглой на границе пораженных и здоровых тканей. При приготовлении препаратов надо избегать попадания в них крови, которая не содержит лейшманий и затрудняет микроскопирование.

Если в мазках обнаружить амастигот не удается, материал, полученный из периферических инфильтратов лейшманиом, может быть использован для получения культур лейшманий на питательных средах. Среди них одной из наиболее распространенных остается кровяной NNN агар, предложенный еще на заре изучения лейшманиозов Нови, Мак-Нилом и Николем. Для его приготовления смесь, состоящую из 14 г бактериологического агара, 6 г поваренной соли и 900 мл дистилированной воды разливают по 3-6 мл в пробирки и стерилизуют. Среда может храниться в холодильнике в течение месяца. Перед использованием среду разогревают до жидкого состояния на водяной бане, охлаждают до 45-480С, добавляют около 1/3 объема (1-2мл) стерильно взятой дефибринированной крови кролика и перемешивают, вращая пробирки между ладонями. После этого пробирки в слегка наклонном положении охлаждают до застывния при комнатной температуре или в холодильнике (косой агар) и помещают в термостат для контроля стерильности и получения конденсационной жидкости. Во избежание высыхания пробки пробирок покрывают резиновыми колпачками. Для подавления роста бактериальной флоры в среду добавляют антибиотики. Лейшмании могут размножаться при содержании 1250 ЕД пенициллина в 1 мл среды; pН среды должен составлять 7,4-7,6.

Исследуемый материал вносится в конденсационную жидкость. Пробирки инкубируются при температуре 220С. Рост лейшманий обнаруживается иногда уже через 3-4 дня, но наиболее итенсивно он происходит через 2-4 недели. NNN агар используется также в качестве твердой фазы двухфазных питательных сред Кузнецовой, коммерческой среды 199 и др. В жидкой среде культура лейшманий растет в виде отдельных, подвижных промастигот. На твердой среде промастиготы образуют прозрачные каплевидные колонии.

Паразитологическая диагностика других форм кожного и кожно-слизистого лейшманиозов проводится теми же методами, что и зоонозной его формы. При мексиканской форме этой инвазии в мазках из лейшманиом в большинстве случаев обнаруживается большое число амастигот L.mexicana. На среде NNN отмечается быстрый и обильный рост их культуры в форме промастигот. В препаратах из пораженных тканей больных кожно-слизистым лейшманиозом лейшманий обнаруживается мало или они отсутствуют. Рост их культуры на кровяном агаре медленный, скудный и неустойчивый.

Диагностика ВЛ осуществляется путем просмотра препаратов и выделения лейшманий в культуре из пульпы костного мозга, взятого путем пункции грудины. При кала-азаре (индийская форма ВЛ ) исследуется содержимое многочисленных лейшманиом, появляющихся на коже у части больных. Выделение возбудителей ВЛ производится также методом биопроб. В качестве подопытных животных используют хомяков (Cricetulus griseus, Mesocricetus auratus), которых заражают суспензией субстрата биопроб, взятых из костного мозга, лимфатических узлов, печени. Если животные не погибают ранее, их забивают на 15-30 день и готовят из тканей печени, селезенки и лимфатических узлов препараты (мазки,отпечатки), которые красят по Романовскому-Гимзе и просматривают. Проводятся также серологические реакции (РНИФ, РНГА и др.). Характерная для ВЛ гиперглобулинемия выявляется методом электрофореза или при помощи формол-гел-теста по Непиру.